綜合微生物的培養(yǎng)方法，包括以下步驟：
（1）前期準(zhǔn)備：（A）滅菌處理；（B）制備Biolite水；（C）檢查設(shè)備和材料；
（2）按比例配制培養(yǎng)材料；
（3）導(dǎo)入曝氣，進(jìn)行繁殖培養(yǎng)；
（4）取液觀察；（a）取液；（b）稀釋菌液；（c）平板培養(yǎng)；
（5）分離并檢測(cè)；
（6）取液儲(chǔ)存；通過(guò)該綜合微生物培養(yǎng)方法簡(jiǎn)單可操作性強(qiáng)，培養(yǎng)的綜合微生物均在3代以內(nèi)，菌類穩(wěn)定不發(fā)生突變，且繁殖快速。
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規(guī)格參數(shù)：
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
克魯斯假絲酵母品牌 | Candida kr | EY-J963341 |
資源名稱: 克魯斯假絲酵母
種屬: Candida krusei
提供形式: 凍干物
安全等級(jí): 1
模式菌株: no
應(yīng)用領(lǐng)域: 高溫生香酵母。
培養(yǎng)基: 5 °Bé麥芽汁瓊脂：5°Bé麥芽汁 1.0L，瓊脂 15.0g，自然pH。121℃，15min。
生長(zhǎng)條件: 28-30℃，好氧
存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
低溫存法:
①簡(jiǎn)單保存法，將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時(shí)間不超過(guò)1～2個(gè)月，若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時(shí)間可達(dá)3～4個(gè)月；②液氮超低溫保存法，將生長(zhǎng)穩(wěn)定期的細(xì)胞懸浮在10%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中，密封于安瓿管內(nèi)，然后控制冷卻速度，使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時(shí)，即可置于-150～-196℃的液氮罐中保存。大多數(shù)微生物如病毒、噬菌體、多種細(xì)菌、放線菌、酵母和原蟲(chóng)、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物，都可用此法保存。
微生物菌種的培養(yǎng)：
⒈ 孢子制備
⑴ 放線菌孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無(wú)機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過(guò)0.5％)，碳源豐富容易造成酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，不利于放線菌孢子的形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為5～14天。
⑵ 霉菌孢子的制備
霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為4～14天。
⒉ 種子制備
⑴ 搖瓶種子制備
搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng)，有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。
⑵ 種子罐種子制備
種子罐種子制備的工藝過(guò)程，因菌種不同而異，一般可分為一級(jí)種子、二級(jí)種子和三級(jí)種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為一級(jí)種子，把一級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為二級(jí)發(fā)酵。如果將一級(jí)種子接入體積較大的種子罐內(nèi)，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級(jí)種子，將二級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為三級(jí)發(fā)酵。同樣道理，使用三級(jí)種子的發(fā)酵，稱為四級(jí)發(fā)酵。
Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus 中文名稱：德氏乳桿菌保加利亞亞種Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus提供形式:凍干管；1mL菌液；安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:奶培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:MRS培養(yǎng)基:：酪胨 10.0g，牛肉 8.0g，酵母 4.0 g，葡萄糖 20.0 g，鎂 0.2 g，鈉 5.0 g，檸檬三銨 2.0 g，磷氫二鉀 2.0 g，錳 0.05 g，吐溫80 1.0 g，蒸餾 1000mL。pH6.2±0.2。傳代方法①凍干管：75%酒精擦拭管壁，后用砂輪在凍干管壁劃兩圈，掰斷，用200μL無(wú)菌或培養(yǎng)基:充分溶解，平板涂布，活化培養(yǎng)。 ②斜面：試管口用75%酒精擦拭后，火焰灼燒，后用無(wú)菌接種鏟切塊，挑取接入平板或斜面，培養(yǎng)。生長(zhǎng)條件:37℃，厭氧。生長(zhǎng)特性G+，菌體長(zhǎng)桿狀，兩端鈍圓，鏈狀排列，無(wú)芽胞，有異染粒。菌落圓形，表面粗糙，突起，邊緣整齊，淺黃色，不透明。發(fā)酵葡萄糖、果糖，不發(fā)酵木糖、蔗糖、阿拉伯糖。從葡萄糖鹽產(chǎn)，接觸酶陰性，牛奶反應(yīng)產(chǎn)、凝，兼性厭氧。15℃不生長(zhǎng)，45℃生長(zhǎng)。產(chǎn)乳。存儲(chǔ)條件:2-8℃冷藏 純度：99%
Acetobacr sp. 中文名稱：醋菌Acetobacr sp.提供形式:凍干管，斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:氧化乙醇產(chǎn)醋培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:醋菌培養(yǎng)基:：Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 20g Agar (瓊脂) 15g Distilled war (蒸餾) 1000ml Adjust (調(diào)) pH to 6.8傳代方法①凍干管：75%酒精擦拭管壁，后用砂輪在凍干管壁劃兩圈，掰斷，用200μL無(wú)菌或培養(yǎng)基:充分溶解，平板涂布，活化培養(yǎng)。 ②斜面：試管口用75%酒精擦拭后，火焰灼燒，后用無(wú)菌接種鏟切塊，挑取接入平板或斜面，培養(yǎng)。生長(zhǎng)條件:30℃，好氧存儲(chǔ)條件:2-8℃冷藏 純度：99%
Agrobacriumrhizogenes(Rikeretal.)Conn 中文名稱：發(fā)根土壤桿菌（發(fā)根植物單胞菌）Agrobacriumrhizogenes(Rikeretal.)Conn安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:9生長(zhǎng)條件:25-28℃ 純度：≥98%
Lactobacillus plantarum 中文名稱：植物乳桿菌Lactobacillus plantarum提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:研究；分析檢測(cè)。檢測(cè)煙、泛、。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:MRS培養(yǎng)基:：酪胨 10.0g，牛肉 8.0g，酵母 4.0 g，葡萄糖 20.0 g，鎂 0.2 g，鈉 5.0 g，檸檬三銨 2.0 g，磷氫二鉀 2.0 g，錳 0.05 g，吐溫80 1.0 g，蒸餾 1000mL。pH6.2±0.2。生長(zhǎng)條件:37℃，微好氧存儲(chǔ)條件:2-8℃ 純度：97%
Alcaligenes│faecalis 中文名稱：蔥頭伯克氏菌Alcaligenes│faecalis提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:化妝品抗菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0002生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法；定期移植法 純度：97%
IymomonasmobilisKluyverandVanNiel 中文名稱：運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單孢菌IymomonasmobilisKluyverandVanNiel安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:產(chǎn)灑精培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:53生長(zhǎng)條件:30℃半?yún)捬跖囵B(yǎng) 純度：97%
Micrococcus│lysodeikticus 中文名稱：溶壁微球菌Micrococcus│lysodeikticus提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:溶菌試驗(yàn)培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0002生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法；定期移植法 純度：96%
Streptococcus│faecalis 中文名稱：糞鏈球菌Streptococcus│faecalis提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:用于測(cè)定各類氨基。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0500生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法；定期移植法 純度：96%
克魯斯假絲酵母品牌賴氨脫羧酶肉湯片劑 (CM0308)大麥芽3-羥基磺(含有數(shù)量不等的3,3'-氧基二烷磺)(約的水溶液,約7.8mol/L)P-GP(P-glycoprotein) P-糖蛋白抗原
W.L.營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基 (CM0309)厚樸酚正基三苯基溴化磷Pepsinogen C peptide 原C蛋白抗原
E.E. 肉湯 (緩沖葡萄糖亮綠膽汁肉湯) (CM0317)和厚樸酚正基三苯基溴化磷PGC-1 Alpha(peroxisome proliferator-activated receptor- Gamma coactivator 1 Alpha) 過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α抗原
DNase 瓊脂 (CM0321)番瀉苷A4-聯(lián)苯PGRN (progranulin) 顆粒蛋白前體抗原
平板計(jì)數(shù)瓊脂 (CM0325)番瀉苷B4-聯(lián)苯PHB(Prohibitin) 抑制素/腫瘤抑制因子抗原
1號(hào)抗生素培養(yǎng)基(Seed 瓊脂) (CM0327)番瀉苷C4-聯(lián)苯PKA(Protein Kinase A) 蛋白激酶A(多肽)
霍亂菌培養(yǎng)基TCBS (CM0333)番瀉苷D2-萘甲PLAU/uPA (Plasminogen activator,urokinase) 型纖溶酶原激活因子（多肽）
Mueller-Hinton 瓊脂 (CM0337)紫草素2-萘甲Podoplanin Protein 平足蛋白抗原
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