實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國(guó)內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長(zhǎng)特性 | 貨號(hào) |
胰腺癌細(xì)胞；HS766T | 貼壁生長(zhǎng) | EY-X63852 |
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細(xì)胞名稱 胰腺癌細(xì)胞；HS766T
形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: 該細(xì)胞1973年由R.Owens等建系，源自62歲白人男性的胰腺癌的轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)。
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:2～1:8傳代，每周換液2～3次
傳代情況: C4
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 培養(yǎng)法（-）
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
維生素D結(jié)合蛋白1檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人肝癌細(xì)胞；Hep3b形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣Vitamin D-binding protein 1
3-甲氧基檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人內(nèi)膜腺癌細(xì)胞；KLE形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣3-normetanephrine
血小板內(nèi)皮細(xì)胞聚集受體 1檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人癌細(xì)胞；MDA-MB-361形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣Platelet endothelial aggregation receptor 1
冠蛋白1C檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人淋巴母細(xì)胞（EBV轉(zhuǎn)化）；NCI-BL2009形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Coronin 1C
硒磷合成酶1檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人導(dǎo)管癌細(xì)胞；MDA-MB-134Ⅵ形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣selenophosphate synthetase I
組蛋白去乙酰化酶2檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人肺腺癌細(xì)胞；NCI-H2009形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣Histone Deacetylase 2
丁型肝炎病抗體檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 豬腎細(xì)胞；PK(15)形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣Hepatitis D virus antibody
26S蛋白酶體非ATP酶調(diào)節(jié)亞基13檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 大鼠胰島β細(xì)胞瘤細(xì)胞；RIN-m5F形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣26S proteasome non-ATPase regulatory subunit 13
LIM和SH3結(jié)構(gòu)域蛋白1檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 小鼠骨髓瘤細(xì)胞；P3/NSI/1-Ag4-1形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣LIM and SH3 domain protein 1
S-骨膠原交聯(lián)檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤（B類）；Z51B3C10H12A12G2F7E7形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣beta-crosslaps
胰高血糖素樣肽2受體檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: SV-40轉(zhuǎn)化肺成纖維細(xì)胞；WI38/VA13形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣ghcagons-like pepfide 2 receptor
狀瘤病16型檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞；W6/32形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣papillomavirus 16
狀瘤病18型檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人肺腺癌細(xì)胞；SPC-A1形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣papillomavirus 18
鐵過氧化物岐化酶檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人滑膜肉瘤細(xì)胞；SW982形態(tài)特性: 多角Fe-Superoxide dismutase
前血小板性蛋白檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 非洲綠猴腎細(xì)胞；VeroE6形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣PPBP;CXCL7
泛素蛋白連接酶E3成分N-識(shí)別蛋白1檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤（B類）；Z51B3C10H12A12G2F7B5形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Ubiquitin Protein Ligase E3 Component N-Recognin 1
拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；NCI-H716形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣Topoisomerase Ⅱ
胰腺癌細(xì)胞；HS766T異72581-71-6英文名：Isosilybin
英文別名：-(2,3-Dihydro-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-(hydroxymethyl)-1,4-benzodioxin-6-yl)-2,3-dihydro-3,5,7-trihydroxy-4H-1-benzopyran-4-one
CAS登錄號(hào)：72581-71-6
分子式：C25H22O10
分子量：482.44
分子結(jié)構(gòu)：
外觀：類白色結(jié)晶
規(guī)格：20 mg/支
純度：≥ 98%
用途：用于含量測(cè)定/鑒定/藥理實(shí)驗(yàn)等。
提取來源：菊科植物水飛薊（Silybum marianum L.Gaertn.）干燥果實(shí)
溶解性：可溶于、、ＤＭＳＯ等溶劑，不溶于。
藥理藥效：抗氧化、消炎、抗腫瘤等作用。
貯存條件： 4℃冷藏、密封、避光
有效期： 2年
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