細胞名稱 乳腺癌細胞；MCF7B
形態特性: 上皮樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細胞為MCF-7細胞的一個亞，表達高水平的褪黑素MT1受體的mRNA，對褪黑素有一定的敏感性。
培養條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:3傳代；3~4天1次。
傳代情況: C5
凍存條件: 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養法（-）
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產品名稱 | 乳腺癌細胞；MCF7B |
生長特性 | 貼壁生長 |
貨號 | EY-X63241 |
產品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設備。
2、 可以處理各種細菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。
培養操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%消化1～2min，將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數，按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液＝(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生的細胞，以0.25％消化成單細胞懸液，計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生的細胞用消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔，計數每孔細胞的數目并計算平均值。
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RANK Ligand (L300) Antibody間二酚
奧美沙坦SP Antibody交酯
1,二氨基胍鹽酸鹽 GSK-3α (D80D1) XP® Rabbit mAb側鏈
3,5-二-L-甲狀腺素,3,5-二甲腺原氨酸GABA(B)R2 (C44A4) Rabbit mAb(4R,5S,6S)-[[(3S,5S)-5-[(二甲基氨基)甲酰基-1-[[(硝基芐基)氧]羰基]-吡咯烷基]硫]-6-[(1R)-1-羥基]-甲基-7-氧代-1-氮雜雙環[3.2.0]庚-2--2-羧酸 硝基芐基酯
短葉松素(標準品)CREB (D76D11) Rabbit mAb
D Akt (pan) (40D4) Mouse mAb (Biotinylad)甲基酸酯
帕比司他CDC20 Antibody2-氨基-1-丁
HDAC靶點抑制劑Cardiogenesis Marker Antibody Sampler Kit戊酮
鹽酸洛美利PAK2 (3B5) Mouse mAb酸甲酯
酯蟾毒配基；蟾力蘇(標準品)MacroH2A1.2 Antibody吡咯烷酮
蒲公英甾(標準品) NKCC1 Antibody2-溴-吡啶
TAK875SimpleChIP® NR4A3 Promor Primers2-噻吩
Calmodulin Antibody2-氨基噻唑
(標準品)APS Antibody5--2-氟甲
華蟾毒它靈;華蟾素(標準品)HAUSP (D17C6) XP® Rabbit mAb2-巰基噻唑啉
維甲酰酚HAUSP (D17C6) XP® Rabbit mAbN-甲基吡咯
2-氨基嘌呤,異腺嘌呤;異腺素;2-APPhospho-c-Kit (Tyr568/570) Antibody糖酸
3,5-二羥基甲MARK4 Antibody5-硝基水楊酸
遠華蟾蜍精(標準品)PHD-2/Egln1 (D31E11) Rabbit mAb-甲酸
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小鼠Ⅱ(FⅡ)ELISA試劑盒ANG-ⅡELISAKit產品規格:48T/96T。
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