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人原代角膜內(nèi)皮原代細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞基本屬性：

種屬來(lái)源：人

組織來(lái)源：眼角膜組織眼角膜組織

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

產(chǎn)品規(guī)格：5x105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%胰蛋bai酶

產(chǎn)品貨期：7-8周左右

運(yùn)輸方式：T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應(yīng)限制：僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類(lèi)疾病的治療產(chǎn)品使用

背景介紹：:人角膜內(nèi)皮細(xì)胞采用混合膠原酶消化結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，人角膜內(nèi)皮細(xì)胞分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會(huì)不由自主地合上以保護(hù)眼睛。為了保持透明，角膜并沒(méi)有血管，透過(guò)外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細(xì)胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細(xì)胞層。角膜的高度透明性和光學(xué)性是正常發(fā)揮生理功能的必要條件之一，而角膜內(nèi)皮細(xì)胞(CEC)在維持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜內(nèi)皮細(xì)胞是角膜內(nèi)層的單層細(xì)胞，構(gòu)成了后彈力層和房水之間的物理屏障，通過(guò)離子“泵"功能調(diào)節(jié)角膜中離子濃度和水分，維持角膜的半脫水狀態(tài)，保證角膜的正常厚度和透明度。一旦角膜內(nèi)皮細(xì)胞功能出現(xiàn)紊亂，常導(dǎo)致角膜水腫而使角膜部分甚至失去透明性。角膜內(nèi)皮細(xì)胞主要功能有：①角膜是的無(wú)血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能；②角膜內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)角膜透明性有重要作用；③角膜內(nèi)皮細(xì)胞通過(guò)Na+-K+-ATP酶活性，維持角膜和房水內(nèi)Na+梯度，防止水分滲入角膜內(nèi)，維持角膜實(shí)質(zhì)層相對(duì)脫水狀態(tài)，維持透明性。

細(xì)胞培養(yǎng)操作：

收貨處理取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)

傳代密度細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)

傳代代數(shù)可傳5代左右；3代以?xún)?nèi)狀態(tài)

傳代比例傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿

傳代方法：

1.吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4.待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基。

原代細(xì)胞培養(yǎng)的主要步驟包括：

?一、剝離組織，去除外膜、結(jié)締組織等?：將組織從動(dòng)物體中取出，并去除可能存在的外膜或結(jié)締組織等雜質(zhì)。

二、?洗滌后將組織剪成1mm左右的小塊?：使用生理鹽水或其他適當(dāng)?shù)木彌_液洗滌組織，然后將其剪成約1mm大小的小塊。

三、?用0.1%～0.2%的消化?：將剪碎的組織塊加入含有0.1%～0.2%的緩沖液中，進(jìn)行消化。消化時(shí)間可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)需求選擇熱消化（37℃）或冷消化（4℃），熱消化時(shí)間短，冷消化時(shí)間長(zhǎng)但條件更溫和。

?四、吹打分散后，過(guò)濾、計(jì)數(shù)?：將消化后的細(xì)胞吹打到一個(gè)離心管中，然后過(guò)濾、計(jì)數(shù)。

五、?按30萬(wàn)/毫升分瓶培養(yǎng)?：將計(jì)數(shù)后的細(xì)胞按30萬(wàn)/毫升的濃度分瓶培養(yǎng)。

公司正在出售的產(chǎn)品：